Πλεονεκτήματα του biobuffer HEPES στην κυτταροκαλλιέργεια

HEPESείναι ένα σημαντικό βιοχημικό παρασκεύασμα στη βιοχημική βιομηχανία.Ν-υδροξυαιθυλπιπεραζίνη-1-αιθανυλουφονικό οξύ, ο χαρακτήρας είναι λευκή κρυσταλλική σκόνη, Είναι ένα αδύναμο οξύ, που χρησιμοποιείται συχνά ως ζβιτεριονικό απόθεμα ασφαλείας και φαρμακευτικό ενδιάμεσο στη βιοχημική βιομηχανία.Συχνά επιλέγεται ως απόθεμα ασφαλείας για την κυτταρική καλλιέργεια λόγω των πλεονεκτημάτων του:

Τοποθεσία της Desheng και προϊόντα αποθέματος ασφαλείας

1Η ικανότητα αποσύνθεσης του HEPES μπορεί να αυξηθεί με την αύξηση της θερμοκρασίας και να αποδυναμωθεί με τη μείωση της θερμοκρασίας, αλλά σε σύγκριση με άλλους αποσβεστήρες, η ικανότητα αποσύνθεσης του HEPES μπορεί να αυξηθεί με την αύξηση της θερμοκρασίας και να εξασθενήσει με τη μείωση της θερμοκρασίας.Η σταθερά αποσύνθεσής του δεν αλλάζει πολύ με την θερμοκρασία., το οποίο κάνειΤαμείο ασφαλείας HEPESΗ ουσία αυτή μπορεί να ελέγχει ένα σταθερό εύρος pH για μεγαλύτερο χρονικό διάστημα και δεν έχει τοξική επίδραση στα κύτταρα.

2Το pH που απαιτείται για τα περισσότερα κύτταρα είναι 7,2-7.4Το HEPES έχει καλή ικανότητα αποθήκευσης σε αυτό το εύρος, αλλά η βέλτιστη τιμή pH ποικίλλει ανάλογα με τον τύπο κυττάρων που καλλιεργούνται.Ενώ οι υποκαλλιεργημένες κυτταρικές γραμμές απαιτούν όξινο pH (7Τα περισσότερα μέσα καλλιέργειας βασίζονται σε σύστημα διοξειδίου του νατρίου (NaHCO3) και CO2 για αποθήκευση.Η συγκέντρωση CO2 στην αέρια φάση θα πρέπει να ισορροπείται με τη συγκέντρωση του νάτριο-βικαρβονίου στο περιβάλλον καλλιέργειαςΣε αυτή την περίπτωση, το καπάκι του φιαλιδίου κυτταρικής καλλιέργειας δεν πρέπει να είναι πολύ σφιχτό για να εξασφαλιστεί η ανταλλαγή αερίων.

Ωστόσο, μετά από αποθήκευση για ορισμένο χρονικό διάστημα, το pH του συστήματος αποθήκευσης θα αυξηθεί με την πτητικότητα του CO2.το διάλυμα καλλιέργειας γίνεται γρήγορα μωβ όταν το κύτταρο υποκαλλιεργείται και ανατινάζεταιΑκόμα και αν επιβιώσει, η δραστηριότητα είναι επίσης πολύ χαμηλή, και ο ρυθμός πολλαπλασιασμού είναι πολύ αργός.Η προσθήκη του HEPES στη λύση καλλιέργειας μπορεί να αποφύγει αυτό το πρόβλημαΤο HEPES μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως απόθεμα ασφαλείας για να αντικαταστήσει το βικαρονικό για να εξαλειφθεί ο περιορισμός του περιβάλλοντος καλλιέργειας υψηλής συγκέντρωσης CO2. Η τελική συγκέντρωση του χρησιμοποιούμενου απόθεμα ασφαλείας HEPES είναι γενικά 10-25mM.

Πώς να χρησιμοποιήσετε το HEPES:

1Το HEPES μπορεί να προστεθεί απευθείας στο προετοιμασμένο διάλυμα καλλιέργειας στην απαιτούμενη συγκέντρωση και στη συνέχεια να αποστειρωθεί με διήθηση.ρυθμίστε το pH σε 7.2 με lN NaOH μετά τη διάλυση, φιλτράρισμα και αποστείρωση και χρήση.

2Πριν από τη χρήση, 99 ml διαλύματος καλλιέργειας προστίθενται στο διαλύμα καλλιέργειας lml, και η τελική συγκέντρωση εφαρμογής εξακολουθεί να είναι 10 mmol/l.1 mol/L (100 x) μέθοδος παρασκευής βασικού διαλύματος HEPES: διαλύεται 23, 8g HEPES σε 90 ml διπλό αποσταγμένο νερό, ρυθμίζεται το pH σε 7, 5- 8, 0 με 1N NaOH, στη συνέχεια αραιώνεται σε 100 ml με νερό, φιλτράρεται και αποστειρώνεται και χορηγούνται φιαλίδια (2 ml/ μπουκάλι), φυλάσσεται σε θερμοκρασία 4°C ή - 20°C.

Η Desheng Biochemical υπενθύμισε ότι όταν χρησιμοποιείται ως αποθηκευτικό για την κυτταρική καλλιέργεια,Το HEPES στο μέσο καλλιέργειας που εκτίθεται σε ορατό φως για περισσότερο από 3 ώρες θα παράγει υπεροξείδιο του υδρογόνου το οποίο είναι τοξικό για τα κύτταραΣυνιστάται να φυλάσσεται το μέσο καλλιέργειας στο σκοτάδι.