HEPES είναι μια σημαντική βιοχημική προετοιμασία στη βιοχημική βιομηχανία. Θεωρείται ένας από τους σημαντικούς απομονωτές στον τομέα της βιολογικής έρευνας. Το χημικό όνομα HEPES είναι: Ν-hydroxyethylpiperazine-1-Ethanesulfonic το οξύ, ο χαρακτήρας είναι άσπρη κρυστάλλινη σκόνη, είναι ένα ασθενές οξύ, που χρησιμοποιείται συχνά ως zwitterionic απομονωτής και φαρμακευτικός μεσάζων στην οργανική χημική βιομηχανία. Επιλέγεται συχνά ως απομονωτής για την κυτταροκαλλιέργεια λόγω των πλεονεκτημάτων του:
Προϊόντα θέσης και απομονωτών Desheng
1. Η ικανότητα αποσύνθεσης HEPES μπορεί να ενισχυθεί με την αύξηση της θερμοκρασίας και να αποδυναμωθεί με τη μείωση της θερμοκρασίας, αλλά έναντι άλλων απομονωτών, η σταθερά αποσύνθεσής της δεν αλλάζει πολύ με τη θερμοκρασία, η οποία κάνει τον απομονωτή HEPES να γίνει απομονωτής Α που διατηρεί καλύτερα τη δομή και τη λειτουργία του ενζύμου. Ο απομονωτής μπορεί να ελέγξει μια σταθερή σειρά pH για μια μακρύτερη χρονική περίοδο και δεν έχει καμία τοξική επίδραση στα κύτταρα.
2. Το pH που απαιτείται για τα περισσότερα κύτταρα είναι 7.2-7.4, HEPES έχει μια καλή ρυθμιστική ικανότητα σε αυτήν την σειρά, αλλά η βέλτιστη αξία pH ποικίλλει με τον τύπο κυττάρου που καλλιεργείται. Οι ινοβλάστεις προτιμούν το υψηλότερο pH (7.4-7.7), ενώ οι υποκαλλιεργημένες γραμμές κυττάρων απαιτούν το όξινο pH (7.0-7.4). Το περισσότερο μέσο πολιτισμού στηρίζεται στο διττανθρακικό άλας νατρίου (NaHCO3) και το σύστημα του CO2 για. Η συγκέντρωση του CO2 στη φάση αερίου πρέπει να ισορροπηθεί με τη συγκέντρωση διττανθρακικών αλάτων νατρίου στο μέσο πολιτισμού. Σε αυτήν την περίπτωση, η ΚΑΠ μπουκαλιών κυτταροκαλλιέργειας δεν πρέπει να βιδωθεί πάρα πολύ σφιχτά για να εξασφαλίσει ανταλλαγή αερίου. Εντούτοις, μετά από την αποθήκευση για μια ορισμένη χρονική περίοδο, το pH του συστήματος απομονωτών θα αυξηθεί με την αεριοποίηση του CO2. Αυτή τη στιγμή, η λύση πολιτισμού γίνεται γρήγορα πορφυρή όταν υποκαλλιεργείται το κύτταρο και φυσιέται, καθιστώντας τα κύτταρα καλλιεργημένα με αυτό το μέσο πολιτισμού δύσκολο να επιζήσει. Ακόμα κι αν επιζεί, η δραστηριότητα αυτό είναι επίσης πολύ χαμηλή, και το ποσοστό πολλαπλασιασμού είναι πολύ αργό. Η προσθήκη HEPES στη λύση πολιτισμού μπορεί να αποφύγει αυτό το πρόβλημα. HEPES μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως απομονωτής για να αντικαταστήσει το διττανθρακικό άλας για να αποβάλει τον περιορισμό του περιβάλλοντος πολιτισμού του CO2 υψηλός-συγκέντρωσης. Η τελική συγκέντρωση του απομονωτή HEPES χρησιμοποιούμενη είναι γενικά 1025mM.
Πώς να χρησιμοποιήσει HEPES:
1. HEPES μπορεί να προστεθεί άμεσα στην έτοιμη λύση πολιτισμού στην απαραίτητη συγκέντρωση, και να αποστειρωθεί έπειτα από τη διήθηση. Προσθέστε 2,38 γραμμάρια του HEPES ανά 1000ml της λύσης πολιτισμού, ρυθμίστε το pH σε 7,2 με NaOH lN μετά από τη διάλυση, φίλτρο και αποστειρώστε και χρησιμοποιήστε αυτή τη στιγμή, η συγκέντρωση χρήσης HEPES είναι 10 mmol/L.
2. Μπορεί επίσης να προετοιμαστεί στη λύση αποθήκευσης 100 Χ (λ mol/L). Πριν τη χρήση, 99ml της λύσης πολιτισμού προστίθεται στη λύση αποθήκευσης lml, και η τελική συγκέντρωση εφαρμογής είναι ακόμα μέθοδος προετοιμασιών λύσης αποθεμάτων 10mmol/L. λ mol/L (100 Χ) HEPES: διαλύστε 23.8g HEPES διπλός-αποσταγμένο στο 90ml νερό, ρυθμίστε το pH 7.5-8.0 με NaOH 1N, κατόπιν αραιώστε σε 100ml με το νερό, φίλτρο και αποστειρώστε, και διανείμετε τα φιαλίδια (2ml/bottle), το κατάστημα σε 4℃ ή -20℃.
Βιοχημικός Desheng που υπενθυμίζεται που πότε χρησιμοποιείται ως απομονωτής για την κυτταροκαλλιέργεια, HEPES στο μέσο πολιτισμού εξέθεσε στο ορατό φως για περισσότερο από 3h θα παραγάγει το υπεροξείδιο υδρογόνου που είναι τοξικό στα κύτταρα. Συνιστάται το μέσο πολιτισμού να αποθηκεύεται στο σκοτάδι.
