Ταμείο ασφαλείας HEPESείναι 4-υδροξυαιθυλπιπεραζίνη-αιθανοσουλφονικό οξύ (N ∆-α-υδροξυθυλπιπεραζίνη-Ν ∆-αιθανοσουλφανικό οξύ), μια λευκή κρυσταλλική σκόνη, αναισθητικό για ιόντα υδρογόνου, η οποία μπορεί να ελέγχει σταθερό εύρος pH για μεγάλο χρονικό διάστημα.Το αποτελεσματικό εύρος ατμοσφαιρικού αέρα είναι pH 6,8-8.2Συνήθως χρησιμοποιείται για την παρασκευή προφυλακτικού αφαιρέσεως πρωτεΐνης, προφυλακτικού κυτταρικής καλλιέργειας κ.λπ.
Η σταθερά διαχωρισμού του HEPES είναι 7.5Κατά την ισόμορφη ανάμειξη του HEPES και του Na-HEPES του, το pH του διαλύματος είναι 7.5Γενικά, προετοιμάζεται πρώτα μια σταθερή μολική συγκέντρωση HEPES και στη συνέχεια το pH ρυθμίζεται στην καθορισμένη τιμή με ισχυρή βάση (γενικά χρησιμοποιείται NaOH).Το NaOH χρησιμεύει μόνο για την παροχή OH. Είναι επίσης δυνατό να χρησιμοποιηθούν άλλες ισχυρές βάσεις όπως το KOH. Όταν η διαφορά pH είναι μεγάλη, χρησιμοποιήστε συμπυκνωμένο NaOH. Για λεπτή ρύθμιση, χρησιμοποιήστε αραιωμένο NaOH. Εάν το στερεό NaOH προστεθεί απευθείας, το NaOH μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την επεξεργασία των ατόμων.Το λάθος είναι πολύ μεγάλο., και όταν το NaOH διαλύεται, η εξωθερμία και η αλλαγή της θερμοκρασίας μπορεί να επηρεάσουν την ακρίβεια του ηλεκτρόδου pH.
Παρασκευάσματα από ταμπούρια λύσης HEPES:
| Λύση Λύση Α: |
Λύση διάλυμα Β: |
| HEPES |
10 mmol/L, pH7.9 |
HEPES |
20 mmol/L, pH7.9 |
| KCl |
10 mmol/l |
NaCl |
420 mmol/l |
| MgCl2 |
10, 5 mmol/l |
MgCl2 |
10, 5 mmol/l |
| ΔΤΔ |
1 mmol/l |
ΔΤΔ |
00, 5 mmol/l |
| 甘油 |
5% |
γλυκερίνη |
25% |
| ΕΔΤΑ |
0.2 mmol/l |
ΕΔΤΑ |
0.2 mmol/l |
| NP-40 |
1% |
|
|
| PMSF (Προσθήκη πριν από τη χρήση) |
1 mmol/l |
PMSF (Προσθήκη μετά τη χρήση) |
00, 5 mmol/l |
| απροτινίνη |
3 mg/l |
απροτινίνη |
5 mg/l |
| λεουπεπτίνη |
3 mg/l |
λεουπεπτίνη |
5 mg/l |
| Πηπσταΐνη |
2 mg/l |
Πηπσταΐνη |
3 mg/l |
Βήματα:
1Συλλέγονται τα κύτταρα σε ένα σωλήνα EP και φυγοκεντρώνονται (4000r/min, 5min, 4 βαθμοί).
2. Πλύνετε τρεις φορές με PBS, φυγοκεντρώστε όπως παραπάνω, πετάξτε το υπερκυκλωτικό.
3. Προσθέστε 100 μl από tampon A, επώαση στον πάγο για 10 λεπτά, φυγοκέντρωση (14000 r/min, 1 min) και απορρίψτε το υπερκυκλωτικό.
4Το σφαιρίδιο ανασύρεται σε 60 μικρολίτρα Buffer B, αναμιγνύεται καλά, φυγοκεντρώνεται πάνω στον πάγο για 30 λεπτά, φυγοκεντρώνεται (14000r/min, 15min, 0 βαθμοί), συλλέγεται το υπερυψωμένο και απορρίπτεται το σφαιρίδιο.
Μεταξύ αυτών, ο ρόλος του λυσάτου Α χρησιμοποιείται κυρίως για την απελευθέρωση κυτοπλασμικών πρωτεϊνών και πρωτεϊνών μεμβράνης, το λυσάτο Β χρησιμοποιείται για την απελευθέρωση πυρηνικών πρωτεϊνών, το NP-40 είναι ταυτόχρονα επιφανειακά δραστικό και απορρυπαντικό,Ο ρόλος του είναι και οι δύο Καταστρέφει την κυτταρική μεμβράνη (ελαφριά), και μπορεί να συνδυαστεί με την απελευθερωμένη πρωτεΐνη για την αποτροπή της βροχόπτωσης,Έτσι το μεγαλύτερο μέρος της πρωτεΐνης του κυτταροπλασμού και της πρωτεΐνης της μεμβράνης μπορεί να αφαιρεθεί μετά την απομάκρυνση του υπερεπιβατικού με φυγοκέντρωση στο πρώτο βήμα.Μετά την εξαγωγή της πυρηνικής πρωτεΐνης, μπορεί να διαλύεται με λυσάτη Α για 2 ώρες και να συνδυάζεται για IP.ή αραιώνονται με άλλα διαλύματα και αντικαθίστανται με συμπυκνωμένους σωλήνες φυγοκέντρωσης για IP ή άλλα πειράματα.
Οι κύριες πρώτες ύλες των αναλυτικών αντιδραστηρίων in vitro της Desheng είναι: 1.Βιολογικός αποθέτης 2. Χημειοφωτιστικά αντιδραστήρια λουμινόλη, ισολουμινόλη, εστέρας ακριδίνης DMAE-NHS, εστέρας ακριδίνης NSP-DMAE-NHS, αλάτι ακριδίνης NSP-SA,Αλάτι ακριδίνης NSP-SA-NHSΤα αντιδραστήρια του νέου Trinder είναι τα TOOS, TOPS, ADOS, ADPS, ALPS, DAOS, HDAOS, MADB, MAOS.Γέλιο διαχωρισμού κατά της ακτινοβολίας για πρόσθετα σωλήνων συλλογής αίματος, ηπαρίνη νατρίου, ηπαρίνη λιθίου, EDTA-2K3K, EDTA-2NA, προωθούν το πήξη, την σκόνη πήξης, κλπ. Επιπλέον παράγει επίσης το μέσο μεταφοράς ιών και το καρβομερές 940/980.Καλωσορίζω τους φίλους να έρθουν να αγοράσουν..
Το μήνυμά σας πρέπει να αποτελείται από 20-3.000 χαρακτήρες!