Company News About Η λύση bufferCAS7365-45-9 HEPES χρησιμοποιείται για να εξαγάγει τη nucleoplasmic πρωτεΐνη
HEPES είναι hydroxyethylpiperazine-ethanesulfonic οξύ 4 (n'-α-hydroxythylpiperazine-N'-Ethanesulfanic οξύ), μια άσπρη σκόνη κρυστάλλου, απομονωτής ιόντων υδρογόνου, ο οποίος μπορεί να ελέγξει μια σταθερή σειρά pH για πολύ καιρό. Η αποτελεσματική σειρά απομονωτών είναι pH6.8-8.2. Συνήθως χρησιμοποιημένος για να προετοιμάσει τον πρωτεϊνικό απομονωτή λύσης εξαγωγής, τον απομονωτή κυτταροκαλλιέργειας, κ.λπ.
Ο διαχωρισμός σταθερός HEPES είναι 7,5. Κατά equimolar μίξη HEPES και NA-HEPES του, τη pH της λύσης είναι 7,5. Γενικά, μια σταθερή μοριακή συγκέντρωση HEPES προετοιμάζεται πρώτα, και έπειτα το pH προσαρμόζεται στη διευκρινισμένη αξία με μια ισχυρή βάση (γενικά συνήθως χρησιμοποιημένο NaOH). Εδώ, NaOH χρησιμεύει μόνο να παρέχει το OH. Είναι επίσης δυνατό να χρησιμοποιηθούν άλλες ισχυρές βάσεις όπως KOH. Όταν η διαφορά pH είναι μεγάλη, η χρήση συγκέντρωσε NaOH. Για τον ακριβή καθορισμό, αραιό NaOH χρήσης. Εάν NaOH το στερεό προστίθεται άμεσα, το λάθος είναι πάρα πολύ μεγάλο, και όταν NaOH είναι διαλυμένο εξωθερμικό και μεταβαλλόμενος τη θερμοκρασία μπορεί να έχει επιπτώσεις στην ακρίβεια του ηλεκτροδίου pH.
Προετοιμασία απομονωτών λύσης HEPES:
| Λύση Α λύσης: | Λύση Β λύσης: | ||
| HEPES | 10mmol/L, pH7.9 | HEPES | 20mmol/L, pH7.9 |
| KCl | 10mmol/L | ΝαCl | 420mmol/L |
| MgCl2 | 1.5mmol/L | MgCl2 | 1.5mmol/L |
| DTT | 1mmol/L | DTT | 0.5mmol/L |
| 甘油 | 5% | γλυκερίνη | 25% |
| EDTA | 0.2mmol/L | EDTA | 0.2mmol/L |
| NP-40 | 1% | ||
| PMSF (προσθέστε πριν τη χρήση) | 1mmol/L | PMSF (προσθέστε τη μεταγενέστερη χρήση) | 0.5mmol/L |
| aprotinin | 3mg/L | aprotinin | 5mg/L |
| leupeptin | 3mg/L | leupeptin | 5mg/L |
| pepstainA | 2mg/L | pepstainA | 3mg/L |
Βήματα:
1. Συλλέξτε τα κύτταρα σε έναν σωλήνα EP και υποβάλτε σε φυγοκέντρωση (4000r/min, 5min, 4 βαθμοί).
2. Πλύντε τρεις φορές με PBS, υποβάλλει σε φυγοκέντρωση όπως ανωτέρω, απορρίψτε το υπερκείμενο νερό.
3. Προσθέστε 100 μl του απομονωτή Α, επωάστε στον πάγο για 10 λ., υποβάλτε (14000 r/min, 1 λ.), και απορρίψτε το υπερκείμενο νερό σε φυγοκέντρωση.
4. Επαναρτήστε το σβόλο σε 60 microliters του απομονωτή Β, αναμίξτε καλά, υποβάλτε σε φυγοκέντρωση στον πάγο για 30min, υποβάλτε (14000r/min, 15min, 0 βαθμός), συλλέξτε το υπερκείμενο νερό και απορρίψτε το σβόλο.
Μεταξύ τους, ο ρόλος του lysate Α χρησιμοποιείται κυρίως για να απελευθερώσει τις κυτταροπλασματικές πρωτεΐνες και οι πρωτεΐνες μεμβρανών, lysate Β χρησιμοποιούνται για να απελευθερώσουν τις πυρηνικές πρωτεΐνες, NP-40 είναι και ένα μέσο επιπολής και ένα απορρυπαντικό, ο ρόλος του είναι και οι δύο που καταστρέφει τη μεμβράνη κυττάρων (ήπια), και μπορεί να συνδυάσει με την απελευθερωμένη πρωτεΐνη να αποτρέψει την πτώση, έτσι η μεγαλύτερη μέρος της κυτταροπλασματικής πρωτεΐνης και της πρωτεΐνης μεμβρανών μπορεί να αφαιρεθεί αφότου αφαιρείται το υπερκείμενο νερό από τη φυγοκεντρικότητα σε πρώτη φάση. Αφότου εξάγεται η πυρηνική πρωτεΐνη, μπορεί να διαλυθεί με το lysate Α για 2h και να συνδυαστεί για τη IP ή αραιωμένος με άλλες λύσεις και αντικατεστημένος με τους συγκεντρωμένους σωλήνες φυγοκεντρωτών για τη IP ή άλλα πειράματα.
Οι κύριες πρώτες ύλες των τεχνητών διαγνωστικών αντιδραστηρίων Desheng είναι: 1. ΑΠΟΜΟΝΩΤΉΣ TRIS, BICINE, HEPES, ΚΑΛΎΜΜΑΤΑ, MOP, ΒΡΎΣΕΣ, EPPS, MOPSO, ΣΩΛΉΝΕΣ, PEP BRI 2. Φωταυγές luminol αντιδραστηρίων, isoluminol, εστέρας dmae-NHS, εστέρας nsp-dmae-NHS, ακριδίνη αλατισμένο nsp-SA, ακριδίνη αλατισμένο nsp-sa-NHS, υδραζίδιο nsp-sa-ADH, εστέρας εμένα-dmae-NHS ακριδίνης ακριδίνης ακριδίνης ακριδίνης 3. ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΉΡΙΑ TOOS, ΚΟΡΥΦΈΣ, ΦΑΣΑΡΊΕΣ, ADPS, ΆΛΠΕΙΣ, DAOS, HDAOS, MADB, MAOS ΝΈΟΥ TRINDER 4. Το πήκτωμα χωρισμού αντι-ακτινοβολίας για τις πρόσθετες ουσίες σωλήνων συλλογής αίματος, ηπαρίνη νατρίου, ηπαρίνη λίθιου, edta-2K3K, edta-2NA, προάγει το πηκτικό, τη σκόνη πήξης, κ.λπ. Επιπλέον, παράγει επίσης το MEDIA μεταφορών ιών και carbomer το 940/980. Ευπρόσδεκτοι φίλοι για να έρθει να αγοράσει.
