Πώς αντιμετωπίζει η ανασυνδυασμένη γλυκερόλη κινάση την παρεμβολή ανίχνευσης;

Οι τριγλυκερίδες (TG) είναι ένα σημαντικό συστατικό των λιπιδίων του αίματος και τα επίπεδα συγκέντρωσής τους είναι βασικοί δείκτες για την αξιολόγηση του κινδύνου καρδιαγγειακών παθήσεων. Για πολλά χρόνια, η κλινική ανίχνευση των τριγλυκεριδίων βασιζόταν κυρίως σε κιτ ανοσοπροσροφητικού ενζυμικού προσδιορισμού (ELISA). Ένα από τα βασικά ένζυμα σε αυτή τη μέθοδο, η γλυκερόλη κινάση (GK), είναι υπεύθυνη για την κατάλυση της παραγωγής γλυκερόλης-3-φωσφορικού από τη γλυκερόλη, ξεκινώντας μια σειρά ενζυμικών αντιδράσεων και, τελικά, καθορίζοντας την περιεκτικότητα σε TG μέσω φωτομετρίας. Ωστόσο, οι παραδοσιακές φυσικές πηγές γλυκερόλης κινάσης συχνά συνοδεύονται από παρεμβαλλόμενα ένζυμα όπως η NADH οξειδάση και η καταλάση, τα οποία μπορούν να καταναλώσουν υποστρώματα αντίδρασης ή να παράγουν παράπλευρες αντιδράσεις, με αποτέλεσμα μεγάλες αποκλίσεις και κακή αναπαραγωγιμότητα των αποτελεσμάτων ανίχνευσης. Αντιμέτωποι με τα προβλήματα σε αυτόν τον κλάδο, η ανασυνδυασμένη γλυκερόλη κινάση έχει αναδυθεί, οδηγώντας τις κλινικές δοκιμές σε μια νέα εποχή ακρίβειας με τα χαρακτηριστικά της υψηλής καθαρότητας και της χαμηλής παρεμβολής.

1, Πρόβλημα παρεμβαλλόμενου ενζύμου: ο «αόρατος δολοφόνος» της παραδοσιακής ανίχνευσης

Στη διαδικασία του ανοσοπροσροφητικού ενζυμικού προσδιορισμού για την ανίχνευση τριγλυκεριδίων, η γλυκερόλη κινάση πρέπει να συνεργαστεί συνεργικά με τη γλυκεροφωσφορική οξειδάση, την υπεροξειδάση και άλλα ένζυμα για την παραγωγή χρωμογόνων ουσιών μέσω της αντίδρασης Trinder. Ωστόσο, εάν το παρασκεύασμα γλυκερόλης κινάσης περιέχει NADH οξειδάση, θα υποβαθμίσει μη ειδικά το NADH (αναχθέν συνένζυμο I), με αποτέλεσμα τη μείωση της απορρόφησης. Εάν υπάρχει καταλάση, θα αποσυνθέσει το υπεροξείδιο του υδρογόνου που παράγεται στην αντίδραση, μειώνοντας την ένταση του χρώματος. Η παρουσία αυτών των δύο παρεμβαλλόμενων ενζύμων μπορεί να προκαλέσει απόκλιση από την τυπική καμπύλη σε ήπιες περιπτώσεις και να ακυρώσει εντελώς τα αποτελέσματα της ανίχνευσης σε σοβαρές περιπτώσεις. Οι φυσικές πηγές γλυκερόλης κινάσης (όπως αυτές που εξάγονται από βακτήρια ή μύκητες) είναι συχνά δύσκολο να αφαιρεθούν πλήρως λόγω των πολύπλοκων διαδικασιών εξαγωγής και των δυσκολιών καθαρισμού τους, καθιστώντας τες ένα σημείο συμφόρησης που περιορίζει την ακρίβεια της ανίχνευσης.

2, Ανασυνδυασμένη τεχνολογία: καθαρισμός από την πηγή και δημιουργία «καθαρών ενζύμων»

Η ανακάλυψη στην ανασυνδυασμένη τεχνολογία DNA έχει φέρει επαναστατικές αλλαγές στην παραγωγή γλυκερόλης κινάσης. Με την εισαγωγή του γονιδίου γλυκερόλης κινάσης σε βακτήρια μηχανικής, όπως η Escherichia coli, και τη βελτιστοποίηση των συνθηκών έκφρασης, η ανασυνδυασμένη γλυκερόλη κινάση μπορεί να επιτύχει αποτελεσματική και ελεγχόμενη έκφραση. Το πιο σημαντικό, το ανασυνδυασμένο σύστημα παραγωγής αποφεύγει τη συνύπαρξη πολλαπλών ενζύμων σε φυσικά στελέχη και οι επακόλουθες διαδικασίες ακριβούς καθαρισμού, όπως η χρωματογραφία και η υπερδιήθηση, μπορούν να αφαιρέσουν αποτελεσματικά παρεμβαλλόμενα συστατικά όπως η NADH οξειδάση και η καταλάση. Η καθαρότητα της ανασυνδυασμένης γλυκερόλης κινάσης είναι πάνω από 95%, η οποία είναι πολύ υψηλότερη από αυτή των φυσικών παρασκευασμάτων ενζύμων, διακόπτοντας την οδό μόλυνσης από παρεμβαλλόμενα ένζυμα από την πηγή.

3, Ενίσχυση σταθερότητας: Επιστημονική απάντηση σε θέματα ευαισθησίας στη θερμοκρασία

Παρόλο που η ανασυνδυασμένη γλυκερόλη κινάση έχει σημαντικά πλεονεκτήματα στην καθαρότητα, η σταθερότητά της σε περιβάλλοντα άνω των 45 ℃ είναι κακή, κάτι που ήταν κάποτε ένα από τα εμπόδια στην ευρεία εφαρμογή της. Μέσω τροποποιήσεων πρωτεϊνικής μηχανικής, όπως η κατευθυνόμενη μεταλλαξιογένεση θέσης και ο ορθολογικός σχεδιασμός, οι ερευνητές έχουν βελτιώσει με επιτυχία τη θερμική σταθερότητα των ενζύμων. Ταυτόχρονα, η βελτιστοποίηση του συστήματος ρυθμιστικού διαλύματος και του συνδυασμού προστατευτικού παράγοντα στη σύνθεση (δίδοντας προσοχή στην αποφυγή των αρνητικών επιπτώσεων της τρεχαλόζης) επέκτεινε περαιτέρω τον χρόνο αποθήκευσης και τη διάρκεια χρήσης της ενζυμικής δραστηριότητας. Σήμερα, η υψηλής ποιότητας ανασυνδυασμένη γλυκερόλη κινάση μπορεί να διατηρήσει τη δραστηριότητά της για μεγάλο χρονικό διάστημα στους 4 ℃ και να αποδώσει σταθερά υπό συνθήκες ανίχνευσης θερμοκρασίας δωματίου, καλύπτοντας πλήρως τις απαιτήσεις αποθήκευσης και λειτουργίας του κιτ αντιδραστηρίων.

Η Hubei Xindesheng Material Technology Co., Ltd. έχει πάντα προσκολληθεί στη φιλοσοφία παραγωγής και λειτουργίας «ποιότητα πρώτη, τεχνολογική ηγεσία» και «καινοτομία και επιδίωξη της αριστείας», ερευνώντας και αναπτύσσοντας συνεχώς αντιδραστήρια που απαιτούνται στον διαγνωστικό τομέα. Από την ίδρυσή της το 2005, έχει ιστορία σχεδόν 20 ετών και χαίρει βαθιάς εμπιστοσύνης και υποστήριξης από τους χρήστες. Τα διαγνωστικά ενζυμικά αντιδραστήρια που αναπτύχθηκαν και παράχθηκαν ανεξάρτητα από την Desheng έχουν πωληθεί σε διάφορα μέρη του κόσμου. Εάν έχετε οποιεσδήποτε σχετικές ανάγκες προμήθειας στο εγγύς μέλλον, μη διστάσετε να επικοινωνήσετε μαζί μας!