Η γλυκερόλη κινάση, ως ένα βασικό παρασκεύασμα ενζύμου που καταλύει τον μεταβολισμό της γλυκερόλης, έχει σημαντική αξία στη βιοχημική έρευνα, την κλινική διάγνωση και τη βιομηχανική παραγωγή. Λόγω των πρωτεϊνικών της ιδιοτήτων, η ενζυμική δραστηριότητα επηρεάζεται εύκολα από διάφορους περιβαλλοντικούς παράγοντες. Η κατανόηση αυτών των επιδρώντων παραγόντων και η λήψη των αντίστοιχων μέτρων συντήρησης είναι μεγάλης σημασίας για τη διασφάλιση της ακρίβειας και της αναπαραγωγιμότητας των πειραματικών αποτελεσμάτων.
1, Η επίδραση της θερμοκρασίας στην δραστηριότητα της γλυκερόλης κινάσης
Η γλυκερόλη κινάση υφίσταται ταχεία μη αναστρέψιμη μετουσίωση και απενεργοποίηση πάνω από τους 60 ℃, και η τρισδιάστατη δομή της αλλάζει μόνιμα, χάνοντας τη καταλυτική της λειτουργία. Επομένως, κατά τη διάρκεια των πειραματικών εργασιών, το παρασκεύασμα του ενζύμου θα πρέπει πάντα να τοποθετείται σε λουτρό πάγου (0-4 ℃) περιβάλλον. Συνιστάται η βραχυπρόθεσμη αποθήκευση σε ψυγείο στους 4-8 ℃. Η μακροχρόνια αποθήκευση θα πρέπει να πραγματοποιείται σε περιβάλλον -20 ℃ ή -80 ℃. Αποφύγετε την επανειλημμένη κατάψυξη και απόψυξη, συνιστάται η αποθήκευση μετά τη συσκευασία.
2, Η επίδραση της τιμής pH στην δραστηριότητα της γλυκερόλης κινάσης
Το ενεργό κέντρο του ενζύμου είναι εξαιρετικά ευαίσθητο στη συγκέντρωση ιόντων υδρογόνου. Οι ακραίες συνθήκες pH (υπερβολικά όξινες ή υπερβολικά αλκαλικές) μπορούν να διαταράξουν την κατανομή του φορτίου και τη χωρική δομή των πρωτεϊνών των ενζύμων, οδηγώντας σε μη αναστρέψιμη απενεργοποίηση. Κοντά στο ισοηλεκτρικό σημείο, τα μόρια του ενζύμου θα κατακρημνιστούν, αν και αυτή η κατακρήμνιση μπορεί μερικές φορές να επαναδιαλυθεί ρυθμίζοντας το pH, μπορεί να συνοδεύεται από απώλεια δραστηριότητας.
Κατά τη διεξαγωγή πειραμάτων που σχετίζονται με τη γλυκερόλη κινάση, χρησιμοποιούνται εξειδικευμένα διαλύματα ρυθμιστικού διαλύματος (όπως Tris HCl, HEPES, κ.λπ.) για ανασύσταση και αραίωση. Αποφύγετε τη χρήση καθαρού νερού ή διαλυμάτων χωρίς ρυθμιστική ικανότητα για την άμεση διάλυση των παρασκευασμάτων ενζύμων. Διατηρήστε το pH του συστήματος αντίδρασης εντός του βέλτιστου εύρους του ενζύμου. Βαθμονομήστε τακτικά το pH-μετρητή για να εξασφαλίσετε ακριβή μέτρηση.
3, Η επίδραση της δύναμης διάτμησης στην δραστηριότητα της γλυκερόλης κινάσης
Τα μηχανικά φαινόμενα είναι επίσης συχνά παραβλεπόμενοι παράγοντες που επηρεάζουν. Η έντονη ανάδευση, η ταλάντωση στροβίλου ή η ταχεία εμφύσηση μπορούν να δημιουργήσουν ισχυρές δυνάμεις διάτμησης, διαταράσσοντας τη χωρική δομή των μορίων του ενζύμου και οδηγώντας σε μετουσίωση και απενεργοποίηση, η οποία είναι συχνά μη αναστρέψιμη. Κατά την ανάμειξη, θα πρέπει να χρησιμοποιείται μια απαλή μέθοδος εμφύσησης. Μπορείτε να χρησιμοποιήσετε μια πιπέτα για να φυσήξετε, να ρουφήξετε και να αναμίξετε καλά αργά και επανειλημμένα. Αποφύγετε τη χρήση βίαιου εξοπλισμού ανάμειξης, όπως ταλαντωτές στροβίλου. Για παρασκευάσματα ενζύμων που είναι ιδιαίτερα ευαίσθητα στις δυνάμεις διάτμησης, η ανάμειξη μπορεί να γίνει αναστρέφοντας αργά το σωλήνα φυγοκέντρησης.
4, Η επίδραση της συγκέντρωσης ιόντων αλάτων στην δραστηριότητα της γλυκερόλης κινάσης
Η κανονική λειτουργία των ενζύμων απαιτεί ένα κατάλληλο ιοντικό περιβάλλον και η άμεση διάλυση με καθαρό νερό θα τοποθετήσει το ένζυμο σε ένα χαμηλό οσμωτικό περιβάλλον, προκαλώντας αλλαγές στην δομική ενυδάτωση και οδηγώντας σε απενεργοποίηση. Εν τω μεταξύ, η έλλειψη απαραίτητων βοηθητικών παραγόντων όπως τα ιόντα μαγνησίου μπορεί επίσης να επηρεάσει την ενζυμική δραστηριότητα. Επομένως, το παρεχόμενο εξειδικευμένο ρυθμιστικό διάλυμα χρησιμοποιείται για ανασύσταση. Βεβαιωθείτε ότι το ρυθμιστικό διάλυμα περιέχει τα απαραίτητα ιόντα αλάτων για σταθερή ενζυμική δραστηριότητα. Προσθέστε απαραίτητους βοηθητικούς παράγοντες σύμφωνα με τις οδηγίες.
5, Η επίδραση άλλων παραγόντων στην δραστηριότητα της γλυκερόλης κινάσης
Εκτός από τους κύριους παράγοντες που αναφέρθηκαν παραπάνω, υπάρχουν και ορισμένες άλλες πτυχές που πρέπει να σημειωθούν: όσον αφορά τον χρόνο αποθήκευσης, ακόμη και υπό βέλτιστες συνθήκες αποθήκευσης, η ενζυμική δραστηριότητα θα μειώνεται αργά με την πάροδο του χρόνου. Όσον αφορά τη συγκέντρωση πρωτεΐνης, η υπερβολική αραίωση μπορεί να επηρεάσει τη σταθερότητα του ενζύμου. Όσον αφορά την οξείδωση, ορισμένα ένζυμα είναι ευαίσθητα στην οξείδωση και απαιτούν την προσθήκη αναγωγικών παραγόντων για προστασία. Η μικροβιακή μόλυνση μπορεί να οδηγήσει σε ενζυμική απενεργοποίηση. Συνιστάται να ελέγχετε τακτικά τον χρόνο αποθήκευσης των παρασκευασμάτων ενζύμων σε απόθεμα. Αποφύγετε την υπερβολική αραίωση των παρασκευασμάτων ενζύμων. Τα ένζυμα που είναι ευαίσθητα στην οξείδωση θα πρέπει να συμπληρώνονται με κατάλληλη ποσότητα DTT ή β - μερκαπτοαιθανόλης. Διατηρήστε το πειραματικό περιβάλλον καθαρό και αποφύγετε τη μικροβιακή μόλυνση.
Για να διασφαλιστεί η αξιοπιστία των πειραματικών αποτελεσμάτων, συνιστάται να ακολουθήσετε τις ακόλουθες διαδικασίες λειτουργίας: διαβάστε προσεκτικά το εγχειρίδιο του προϊόντος πριν από το πείραμα. Προετοιμάστε όλα τα αντιδραστήρια και τα όργανα πριν βγάλετε το παρασκεύασμα του ενζύμου. Ακολουθήστε αυστηρά τη συνιστώμενη θερμοκρασία λειτουργίας για το πείραμα. Χρησιμοποιήστε φρέσκα παρασκευασμένο ρυθμιστικό διάλυμα και αντιδραστήρια αντίδρασης. Δημιουργήστε κατάλληλους θετικούς και αρνητικούς ελέγχους. Λεπτομερής καταγραφή των πειραματικών συνθηκών και μεθόδων.
Η Hubei Xindesheng Material Technology Co., Ltd. έχει δημιουργήσει μια επαγγελματική ομάδα παρασκευασμάτων ενζύμων για την ανάπτυξη και παραγωγή παρασκευασμάτων ενζύμων κατάλληλων για αντιδραστήρια in vitro διαγνωστικής και άλλους τομείς. Επί του παρόντος, τα παρασκευάσματα ενζύμων που διατίθενται προς πώληση περιλαμβάνουν γλυκερόλη κινάση, ουρικάση, γαλακτική αφυδρογονάση, κρεατινική κινάση κ.λπ. Εάν έχετε οποιεσδήποτε ανάγκες αγορών στο εγγύς μέλλον, μη διστάσετε να ρωτήσετε!
Το μήνυμά σας πρέπει να αποτελείται από 20-3.000 χαρακτήρες!
