Η ανώμαλη PCR καμπύλη ενίσχυσης προκαλείται από τα μέσα μεταφορών ιών;

Στην ανίχνευση νουκλεϊνικού οξέος του νέου coronavirus, η πολύ βασική τεχνολογία είναι το σε πραγματικό χρόνο φθορισμού ποσοτικό PCR πείραμα του νουκλεϊνικού οξέος, το οποίο είναι η βασική τεχνολογία της νέας ανίχνευσης coronavirus. Έτσι ποια επίδραση ο ιός μεταφέρει τα μέσα που χρησιμοποιούνται για τις ενώσεις δειγματοληψίας ιών έχει στη PCR ενίσχυση των νουκλεϊνικών οξέων; Αυτό το άρθρο κάνει μια συνοπτική συζήτηση.

Ο ιός μεταφέρει τα μέσα έχει επιπτώσεις PCR νουκλεϊνικού οξέος στην ενίσχυση;

Κρίση του αποτελέσματος από τη PCR καμπύλη ενίσχυσης:

Το φθορισμού ποσοτικό PCR όργανο στη νέα ανίχνευση κορωνών έχει γίνει ένας στερεότυπος εξοπλισμός για τη μοριακή έρευνα της βιολογίας. Η γρήγορη ανάπτυξη αυτής της μεθόδου ανίχνευσης και η επείγουσα ανάγκη του στόχου ανίχνευσης έχουν υποβάλει επίσης τις υψηλότερες απαιτήσεις για το προσωπικό ανίχνευσης, που απαιτεί τους για να είναι ικανούς στην κρίση των αποτελεσμάτων των στοιχείων. Για την κρίση του αποτελέσματος ποσοτικό PCR φθορισμού, η πιό διαισθητική κρίση είναι να δει εάν η καμπύλη ενίσχυσης είναι κανονική. Στα κανονικά πειράματα, θα αντιμετωπίσετε τα προβλήματα με τις ανώμαλες καμπύλες ενίσχυσης, όπως οι απορριμμένες καμπύλες ενίσχυσης, φτωχή επανάληψη μεταξύ των πολλαπλάσιων φρεατίων, και των ανυψωμένων καμπυλών ενίσχυσης των αρνητικών δειγμάτων.

Οι λόγοι για την ανώμαλη PCR ενίσχυση κάμπτουν:

1. Επιβεβαιώστε εάν οι τοποθετήσεις λογισμικού είναι σωστές. Ελέγξτε τις οδηγίες εξαρτήσεων για να ελέγξετε εάν ο χρόνος, η θερμοκρασία, ο αριθμός κύκλων, η συλλογή φθορισμού, κ.λπ. τίθενται σωστά, και εάν το επιλεγμένο αντιδραστήριο περιέχει ROX ως φθορισμού χρωστική ουσία αναφοράς. Μερικά αποτελέσματα δείχνουν ότι η καμπύλη ενίσχυσης της πολλών συστατικών γραφικής παράστασης δεν είναι ανυψωμένη, το οποίο είναι προφανώς ένα αρνητικό δείγμα, αλλά η καμπύλη γραφικών παραστάσεων ενίσχυσης είναι ανυψωμένη, έτσι ώστε διασχίζει τη γραμμή κατώτατων ορίων, και έχει αντ' αυτού μια αξία CT. Αυτό είναι επειδή το λογισμικό κάνει ένα λάθος στην αυτόματη αφαίρεση της βασικής γραμμής. Η μέθοδος με το χέρι τη βασική γραμμή μπορεί να είναι κανονική με τον επαναπροσδιορισμό της βασικής γραμμής.

2. Σιγουρευτείτε ότι τα αναλώσιμα και τα εξαρτήματα οργάνων χρησιμοποιούνται σωστά. Τα αναλώσιμα είναι σημαντικότερα για σε πραγματικό χρόνο PCR. Πολλές ανώμαλες καμπύλες ενίσχυσης προκαλούνται από την ανάρμοστη χρήση των αναλωσίμων.

3. Για να καθορίσετε εάν τα αντιδραστήρια χρησιμοποιούμενα είναι κανονικά, αρχικά αποφασίστε εάν τα αντιδραστήρια είναι αποτελεσματικά, συμπεριλαμβανομένου του ελέγχου εάν τα αντιδραστήρια είναι εντός της περιόδου ισχύος, εάν είναι επανειλημμένα παγωμένα και ξεπαγωμένα πολλές φορές, και εάν οι όροι μεταφορών είναι κανονικοί. Εάν όλος ο ανωτέρω είναι κανονικός, κατόπιν πρέπει να εξετάσετε εάν υπάρχει οποιαδήποτε αμέλεια στις λεπτομέρειες λειτουργίας.

Από τα ανωτέρω σημεία, μπορεί να δει ότι τα μέσα μεταφορών ιών δεν έχουν επιπτώσεις άμεσα στην καμπύλη ενίσχυσης, έχουν επιπτώσεις μόνο στα δείγματα ιών, αλλά αυτό μπορεί να γίνει μέσω ενός πειράματος ελέγχου με τα θετικά δείγματα για να καθορίσει εάν η λύση συντήρησης ιών ασκεί επίδραση στα δείγματα ιών. Υπάρχουν δύο τύποι μέσων μεταφορών ιών Desheng, και ο αδρανοποιημένος τύπος και ο ενεργοποιημένος τύπος είναι κατάλληλοι για PCR νουκλεϊνικού οξέος τα πειράματα.