Βελτιστοποίηση της ΑΝΩΤΑΤΗΣ μεθόδου για τον προσδιορισμό των ελεύθερων λιπαρών οξέων

Ο προσδιορισμός των ελεύθερων λιπαρών οξέων στον ορό ή το πλάσμα υιοθετεί συνήθως chromogen Trinder την ενζυμική φωτομετρική μέθοδο. Εντούτοις, λόγω των χαρακτηριστικών αυτής της δοκιμής, η ανίχνευση των λιπαρών οξέων επηρεάζεται από πολλούς παράγοντες, και η μέθοδος ανίχνευσης πρέπει να βελτιστοποιηθεί και να βελτιωθεί για να βελτιώσει την ακρίβεια της ανίχνευσης.

Chromogen Trinder αρχή ανίχνευσης FFA:

Η μέθοδος ανίχνευσης έχει τρία βήματα αντίδρασης: τα ελεύθερα λιπαρά οξέα (FFA ή NEFA) αντιδρούν με υπερβολικό CoA για να παραγάγουν ακύλιο-CoA στο πλαίσιο της δράσης του synthase ακετυλικός-CoA (ACS), και αντιδρούν με το οξυγόνο στο πλαίσιο της δράσης της οξειδάσης ακετυλικός-CoA (ACO). Η αντίδραση παράγει 2,3 το δια-enoyl CoA και το υπεροξείδιο υδρογόνου, και η αντίδραση Trinder χρησιμοποιείται για να ανιχνεύσει το υπεροξείδιο υδρογόνου, και το περιεχόμενο FFA μπορεί να ληφθεί.

Οι ΚΟΡΥΦΕΣ συστήνονται για τον προσδιορισμό FFA chromogen

Προβλήματα στις μεθόδους προσδιορισμού και βελτιστοποίησης FFA:

1. Υπερβολικό Coenzyme Α στην αντίδραση θα παρεμποδίσει την αντίδραση του υπεροξειδίου υδρογόνου και chromogen Trinder, που καθιστά ολόκληρο το αποτέλεσμα της δοκιμής χαμηλό. Το ν-Ethylmaleimide (NEM) μπορεί να χρησιμοποιηθεί για να αφαιρέσει υπερβολικός Coenzyme Α. Η σταθερότητα επηρεάζεται NEM πολύ. Περιορισμένος, μόνο μια εβδομάδα.

2. Ακετυλικό synthetase CoA και ακετυλική η οξειδάση CoA χρησιμοποιούμενα έχουν τις διαφορετικές ιδιομορφίες υποστρωμάτων για τα διαφορετικά ελεύθερα λιπαρά οξέα, που προκαλούν τις διαφορές στα αποτελέσματα προσδιορισμού. Οι διαφορετικές ενζυμικές πηγές έχουν τα διαφορετικά οξέα ιδιομορφιών υποστρωμάτων λιπαρά δωρεάν με τα διαφορετικά μήκη αλυσίδων Γ. Δηλαδή η ικανότητα απάντησης είναι διαφορετική. Υπάρχουν 6 είδη του FFA στον ανθρώπινο ορό, και μόνο τα ένζυμα με την υψηλή ιδιομορφία σε τα δεν μπορούν να κάνουν καμία διαφορά στα αποτελέσματα μέτρησης.

3. Λόγω της επιρροής CoA στην αντίδραση, η γραμμική σειρά των αποτελεσμάτων στοιχείων είναι στενή. Το χρώμα FFA που μετριέται η παρέμβαση σχετικά με την αγορά είναι MEHA, TBHB, TOOS, κ.λπ., αλλά πολύ από CoA, και πρέπει να είναι υπερβολικό, έτσι απαιτείται. Λιγότερο chromogen. SCEP δεν από Coenzyme Α αλλά είναι ασταθές. Οι ΦΑΣΑΡΙΕΣ και οι ΚΟΡΥΦΕΣ είναι λιγότερο από CoA, και οι ΚΟΡΥΦΕΣ έχουν έναν υψηλότερο μοριακό συντελεστή απορρόφησης, έτσι είναι ένα καλύτερο chromogen υπόστρωμα.

4. Προσθέστε sulfhydryl σύνθετα DTNB και MIT για να μειώσετε το ποσό NEM. Η sulfhydryl ομάδα του DTNM μπορεί να αντιδράσει με τη sulfhydryl ομάδα CoA για να αφαιρέσει την παρέμβαση chromogen. Ένα μικρό ποσό MIT μπορεί να αφαιρέσει τη sulfhydryl ομάδα CoA και επίσης πράξεων ως συντηρητικό. Με βάση τη χρήση ΑΝΩΤΑΤΟ chromogen, η παρέμβαση CoA μπορεί να αποβληθεί πλήρως, και η σταθερότητα βελτιώνεται πολύ.

Εάν έχετε τις υψηλότερες απαιτήσεις για τα αποτελέσματα προσδιορισμού FFA, μπορείτε να επιλέξετε μια εξάρτηση καλύτερης ποιότητας βασισμένη στα ανωτέρω σημεία. Το Desheng παράγει τις πρώτες ύλες για το FFA και άλλες εξαρτήσεις προσδιορισμού δεικτών. Εάν οι ΚΟΡΥΦΕΣ χρησιμοποιούνται για να καθορίσουν FFA άμεσα, λόγω της φτωχής σταθερότητας της λύσης, συστήνεται να προετοιμαστεί μια λύση εργασίας για την άμεση χρήση πριν τη χρήση.