Βελτιστοποίηση της ΑΝΩΤΑΤΗΣ μεθόδου για τον προσδιορισμό των ελεύθερων λιπαρών οξέων

Για τον προσδιορισμό των ελεύθερων λιπαρών οξέων στον ορό ή στο πλάσμα χρησιμοποιείται συνήθως η φωτομετρική μέθοδος των ενζύμων χρωμογόνου Trinder.η ανίχνευση λιπαρών οξέων επηρεάζεται από πολλούς παράγοντες, και η μέθοδος ανίχνευσης πρέπει να βελτιστοποιηθεί και να βελτιωθεί για να βελτιωθεί η ακρίβεια της ανίχνευσης.

Αρχή ανίχνευσης χρωμογόνου από τρυπαντήρα:

Η μέθοδος ανίχνευσης περιλαμβάνει τρία στάδια αντίδρασης: τα ελεύθερα λιπαρά οξέα (FFA ή NEFA) αντιδρούν με το πλεόνασμα CoA για να παράγουν ακυλο-CoA υπό την δράση της ακετυλο-CoA συνθεάσης (ACS),και αντιδρά με οξυγόνο υπό την δράση της ακετυλο- CoA οξειδάσης (ACO)Η αντίδραση παράγει 2,3-trans-enoyl CoA και υπεροξείδιο του υδρογόνου, και η αντίδραση Trinder χρησιμοποιείται για την ανίχνευση υπεροξειδίου του υδρογόνου και μπορεί να ληφθεί το περιεχόμενο FFA.

Το TOPS συνιστάται για τον προσδιορισμό της FFA του χρωμογόνου

Προβλήματα μεθόδων προσδιορισμού και βελτιστοποίησης FFA:

1Η υπερβολική ποσότητα του συνενζύμου Α στην αντίδραση θα παρεμβαίνει στην αντίδραση του υπεροξειδίου του υδρογόνου και του χρωμογόνου Trinder, καθιστώντας το συνολικό αποτέλεσμα της δοκιμής χαμηλό.Το N- αιθυλομαλεϊμίδιο (NEM) μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την αφαίρεση του υπερβολικού συνένζυμου Α.Η σταθερότητα του ΝΕΜ επηρεάζεται πολύ.

2Η χρησιμοποιούμενη συνθεάση ακετυλοκοαλοειδούς και η χρησιμοποιούμενη οξειδάση ακετυλοκοαλοειδούς έχουν διαφορετικές ιδιαιτερότητες υποστρώματος για διαφορετικά ελεύθερα λιπαρά οξέα, γεγονός που προκαλεί διαφορές στα αποτελέσματα προσδιορισμού.Διαφορετικές πηγές ενζύμων έχουν διαφορετικές ιδιαιτερότητες υποστρώματος για ελεύθερα λιπαρά οξέα με διαφορετικό μήκος αλυσίδας CΥπάρχουν 6 είδη FFA στον ανθρώπινο ορό, και μόνο ένζυμα με υψηλή ειδικότητα σε αυτά δεν μπορούν να κάνουν καμία διαφορά στα αποτελέσματα της μέτρησης.

3Λόγω της επιρροής του CoA στην αντίδραση, το γραμμικό εύρος των αποτελεσμάτων των δεδομένων είναι στενό.Και πρέπει να είναι υπερβολικό.Το SCEP δεν παρεμβαίνει από το συνένζυμο Α, αλλά είναι ασταθές.Έτσι είναι ένα καλύτερο υποστρώμα χρωμογόνου.

4. Προσθέστε το συμπλέγμα θειοϋδρικού DTNB και MIT για να μειώσετε την ποσότητα του NEM. Η ομάδα θειοϋδρικού του DTNM μπορεί να αντιδράσει με την ομάδα θειοϋδρικού του CoA για να αφαιρέσει την παρέμβαση στο χρωμογόνο.Μικρή ποσότητα MIT μπορεί να αφαιρέσει την ομάδα σουλφυδρυλίου του CoA και επίσης να λειτουργήσει ως συντηρητικόΜε βάση τη χρήση του χρωμογόνου TOPS, η παρέμβαση του CoA μπορεί να εξαλειφθεί πλήρως και η σταθερότητα βελτιώνεται σημαντικά.

Εάν έχετε υψηλότερες απαιτήσεις για τα αποτελέσματα προσδιορισμού FFA, μπορείτε να επιλέξετε ένα κιτ καλύτερης ποιότητας με βάση τα παραπάνω σημεία.Η Desheng παράγει τις πρώτες ύλες για τις συσκευές προσδιορισμού των δείκτων και άλλες συσκευές προσδιορισμού των δείκτωνΕάν το TOPS χρησιμοποιείται για τον άμεσο προσδιορισμό της FFA, λόγω της κακής σταθερότητας του διαλύματος, συνιστάται να προετοιμαστεί ένα λειτουργικό διάλυμα για άμεση χρήση πριν από τη χρήση.