Ομοιότητες και διαφορές μεταξύ Tris και του tris-HCL και του tris-EDTA

Tris: trimethylol aminomethane

Το Trismethylaminomethane το (Tris) είναι μια οργανική ένωση με τον τύπο (HOCH 2) 3CNH 2. Το Tris χρησιμοποιείται για να προετοιμάσει τους απομονωτές στη βιοχημεία και τα μοριακά πειράματα της βιολογίας. Και οι απομονωτές TAE και TBE (που χρησιμοποιούνται για να διαλύσουν τα νουκλεϊνικά οξέα) που χρησιμοποιούνται στα βιοχημικά πειράματα απαιτούν Tris, το οποίο μπορεί να συμπυκνώσει με τις αλδεΰδες όταν περιέχει τις αμινο ομάδες. Η αποθήκευση των χαρακτηριστικών Tris είναι μια αδύνατη βάση. Στη θερμοκρασία δωματίου (25°C), το pKa του είναι 8,1. Σύμφωνα με την αποθηκεύοντας θεωρία, η αποτελεσματική αποθηκεύοντας σειρά του απομονωτή Tris είναι μεταξύ του pH 7,0 και 9,2.

Το pH του διαλύματος ύδατος της βάσης Tris είναι περίπου 1 0,5. Γενικά, το υδροχλωρικό οξύ προστίθεται για να ρυθμίσει την αξία pH στην επιθυμητή αξία, και έπειτα το ρυθμιστικό διάλυμμα με αυτήν την αξία pH μπορεί να ληφθεί. Αλλά συγχρόνως, η επιρροή της θερμοκρασίας στο pKa Tris πρέπει να ελεγχθεί.

Δεδομένου ότι ο απομονωτής Tris είναι μια αδύνατη αλκαλική λύση, το DNA θα είναι σε μια τέτοια λύση, με αυτόν τον τρόπο βελτιώνοντας τη διαλυτότητά του. Οι άνθρωποι προσθέτουν συχνά EDTA στον απομονωτή υδροχλωρικού οξέος Tris για να κάνουν το «απομονωτή TE». TE ο απομονωτής χρησιμοποιείται για τη σταθεροποίηση και την αποθήκευση DNA. Εάν το pH-ρυθμισμένο διάλυμα οξέος αντικαθίσταται με το οξικό οξύ, κατόπιν ο «απομονωτής TAE» (Tris/Acetate/EDTA) λαμβάνεται, και εάν αντικαθίσταται με το βορικό οξύ, κατόπιν ο «απομονωτής TBE» (Tris/Borate/EDTA) λαμβάνεται. Αυτοί οι δύο απομονωτές χρησιμοποιούνται στα πειράματα ηλεκτροφόρησης νουκλεϊνικού οξέος.

1 tris-HCL Μ (pH7.4, 7,6, 8,0)

Συστατική συγκέντρωση 1M tris-HCL

Όγκος 1L προετοιμασιών

Μέθοδος προετοιμασιών:

1. Ζυγίστε 121.1g Tris σε μια κούπα 1L.

2. Προσθέστε για 800ml του εξιοντισμένου νερού και ανακατώστε για να διαλύσετε.

3. Προσθέστε το ποσό του συγκεντρωμένου HCL όπως φαίνεται στον πίνακα για να ρυθμίσετε κατωτέρω την απαραίτητη αξία pH.

συγκεντρωμένο pH HCL

7.4 για 70ml

7.6 για 60ml

8.0 για 42ml

4. Φέρτε τη λύση σε 1 Λ.

5. Μετά από την υψηλής θερμοκρασίας και υψηλή αποστείρωση, αποθηκεύω στη θερμοκρασία δωματίου.

Σημείωση: Επιτρέψτε στη λύση για να δροσίσετε στη θερμοκρασία δωματίου πρίν ρυθμίζει την αξία pH, επειδή η αξία pH της λύσης Tris ποικίλλει πολύ με τη θερμοκρασία. Όταν η θερμοκρασία αυξάνεται από 1°C, η αξία pH της λύσης μειώνεται από περίπου 0,03 μονάδες.

1.5 tris-HCL Μ (pH8.8)

Συστατική συγκέντρωση 1.5M tris-HCL

Όγκος 1L προετοιμασιών

Μέθοδος προετοιμασιών

1. Ζυγίστε 181.7g Tris σε μια κούπα 1L.

2. Προσθέστε για 800ml του εξιοντισμένου νερού και ανακατώστε για να διαλύσετε.

3. Ρυθμίστε το pH σε 8,8 με το συγκεντρωμένο HCL.

4. Φέρτε τη λύση σε 1 Λ.

5. Μετά από την υψηλής θερμοκρασίας και υψηλή αποστείρωση, αποθηκεύω στη θερμοκρασία δωματίου.

Σημείωση: Η λύση πρέπει να δροσιστεί στη θερμοκρασία δωματίου πρίν ρυθμίζει την αξία pH, επειδή η αξία pH της λύσης Tris ποικίλλει πολύ με τη θερμοκρασία,

Για κάθε αύξηση 1°C στη θερμοκρασία, το pH της λύσης μειώνεται από περίπου 0,03 μονάδες.

Τα πλεονεκτήματα του απομονωτή tris-HCL είναι:

① επειδή η βάση Tris είναι πιό αλκαλική, μπορείτε να χρησιμοποιήσετε αυτό το σύστημα απομονωτών για να προετοιμάσετε ένα ρυθμιστικό διάλυμμα με ένα ευρύ φάσμα των τιμών pH από όξινο σε αλκαλικό

② λίγη παρέμβαση στη βιοχημική διαδικασία, καμία πτώση με το ασβέστιο, ιόντα μαγνήσιου και ιόντα βαρύ μετάλλου.

Τα μειονεκτήματα είναι:

① η αξία pH του ρυθμιστικού διαλύμματος επηρεάζεται πολύ από τη συγκέντρωση της λύσης, το ρυθμιστικό διάλυμμα είναι αραιωμένο δέκα φορές, και η αλλαγή στην αξία pH είναι μεγαλύτερη από 0,1

② η επίδραση θερμοκρασίας είναι μεγάλη, και η αλλαγή θερμοκρασίας έχει μια μεγάλη επιρροή στην αξία pH του ρυθμιστικού διαλύμματος, δηλαδή: △pKa/℃=-0.031, παραδείγματος χάριν: το pH του ρυθμιστικού διαλύμματος σε 4℃=8.4, έπειτα η αξία pH σε 37℃= 7,4, έτσι αυτό πρέπει να προετοιμαστεί στη θερμοκρασία χρήσης, ο απομονωτής tris-HCL που προετοιμάζεται στη θερμοκρασία δωματίου δεν μπορεί να χρησιμοποιηθεί σε 0 ℃ ~ 4 ℃.

③ είναι εύκολο να απορροφηθεί το CO2 στον αέρα, έτσι ο έτοιμος απομονωτής πρέπει να σφραγιστεί στενά.

④ αυτό το ρυθμιστικό διάλυμμα θα παρεμποδίσει ορισμένα ηλεκτρόδια pH, έτσι χρήση ένα ηλεκτρόδιο συμβατό με τη λύση Tris.

Η λύση Tris μπορεί να απορροφήσει το διοξείδιο του άνθρακα από τον αέρα, να δώσει προσοχή στη σφράγιση κατά τη διάρκεια της αποθήκευσης, εάν απαιτείτε τη στειρότητα, εσείς μπορεί να προσθέσει το αζίδιο νατρίου.

TE είναι απομονωτής tris-EDTA (10mM Tris, EDTA 1mM, pH7.4 pH7.6 pH8.0).

Συνήθως χρησιμοποιημένα μοριακά αντιδραστήρια της βιολογίας για τη διάλυση DNA.

Προετοιμάστε τον απομονωτή 10×TE (pH7.4, 7,6, 8,0)

Συστατική συγκέντρωση: tris-HCL 100mM, EDTA 10mM

Όγκος προετοιμασιών: 1L

Μέθοδος προετοιμασιών:

1. Μετρήστε την ακόλουθη λύση και τοποθετήστε σε μια κούπα 1L.

απομονωτής tris-HCL 1M (pH7.4, 7,6, 8,0) 100 μιλ.

EDTA 500 χιλ. (pH8.0) 20ml

2. Προσθέστε για 800ml του εξιοντισμένου νερού στην κούπα και το μίγμα ομοιόμορφα.

3. Μετά από να ρυθμίσει τον όγκο σε 1L, αποστειρώνω σε υψηλής θερμοκρασίας και την υψηλή πίεση.

4. Κατάστημα στη θερμοκρασία δωματίου.