Ομοιότητες και διαφορές μεταξύ Tris και του tris-HCL και του tris-EDTA

Tris: τριμεθυλολημινομεθάνη

Το τρισμεθυλαμινομεθάνιο (Tris) είναι μια οργανική ένωση με τον τύπο (HOCH 2) 3CNH 2.Τρις βάσηΧρησιμοποιείται για την προετοιμασία αποστάτων σε πειράματα βιοχημείας και μοριακής βιολογίας.που μπορεί να συμπυκνωθεί με αλδεΰδη όταν περιέχει αμινοομάδεςΤα χαρακτηριστικά του Tris είναι αδύναμη βάση, με pKa 8 σε θερμοκρασία δωματίου (25 °C).1Σύμφωνα με τη θεωρία του αποθήκευσης, το αποτελεσματικό εύρος αποθήκευσης του αποθήκευσης της Τρις είναι μεταξύ pH 7,0 και 9.2.

Το pH του υδατικού διαλύματος της βάσης Τρις είναι περίπου 10.5Γενικά, το υδροχλωρικό οξύ προστίθεται για να ρυθμίσει την τιμή pH στην επιθυμητή τιμή, και στη συνέχεια μπορεί να ληφθεί το διάλυμα με αυτή την τιμή pH.Η επιρροή της θερμοκρασίας στο pKa του Tris πρέπει να ελέγχεται..

Δεδομένου ότι το Tris buffer είναι ένα αδύναμο αλκαλικό διάλυμα, το DNA θα αποπροτονιστεί σε ένα τέτοιο διάλυμα, βελτιώνοντας έτσι τη διαλυτικότητά του.Οι άνθρωποι συχνά προσθέτουν EDTA στο θωρακιστικό υδροχλωρικού οξέος Tris για να κάνουν "ΤΕ θωρακιστικό"Εάν το pH-προσαρμοσμένο οξικό διάλυμα αντικατασταθεί με οξικό οξύ, τότε λαμβάνεται "απόσπασμα TAE" (Tris/Acetate/EDTA),και αν αντικατασταθεί με βορικό οξύ, τότε λαμβάνεται το "TBE buffer" (Tris/Borate/EDTA).

1 M Tris-HCl (pH7).4, 7.6, 8.0)

Συγκέντρωση συστατικού 1M Tris-HCl

Όγκος παρασκευής 1L

Μέθοδος παρασκευής:

1Ζυγίζεις 121,1 γραμμάρια Τρις σε ένα φλιτζάνι 1 λίτρα.

2Προσθέστε περίπου 800 ml αποιονισμένου νερού και ανακατέψτε για να διαλυθεί.

3Προσθέστε την ποσότητα συμπυκνωμένου HCl όπως φαίνεται στον παρακάτω πίνακα για να ρυθμίσετε την απαιτούμενη τιμή pH.

pH Συγκεντρωμένο HCl

7.4 περίπου 70 ml

7.6 περίπου 60 ml

8.0 περίπου 42 ml

4Φέρτε το διάλυμα σε 1 λίτρο.

5Μετά την αποστείρωση σε υψηλή θερμοκρασία και υψηλή πίεση, αποθηκεύεται σε θερμοκρασία δωματίου.

Σημείωση: Αφήστε το διάλυμα να κρυώσει σε θερμοκρασία δωματίου πριν προσαρμόσετε την τιμή pH, επειδή η τιμή pH του διαλύματος Tris ποικίλλει σημαντικά με την θερμοκρασία.Όταν η θερμοκρασία αυξάνεται κατά 1 ° C, η τιμή pH του διαλύματος μειώνεται κατά περίπου 0,03 μονάδες.

1.5 M Tris-HCl (pH8.8)

Συγκέντρωση συστατικού 1,5 M Tris-HCl

Όγκος παρασκευής 1L

Μέθοδος παρασκευής

1Ζυγίζει 181,7 γραμμάρια Τρις σε ένα ποτήρι 1 λίτρα.

2Προσθέστε περίπου 800 ml αποιονισμένου νερού και ανακατέψτε για να διαλυθεί.

3Ρυθμίστε το pH σε 8,8 με συμπυκνωμένο HCl.

4Φέρτε το διάλυμα σε 1 λίτρο.

5Μετά την αποστείρωση σε υψηλή θερμοκρασία και υψηλή πίεση, αποθηκεύεται σε θερμοκρασία δωματίου.

Σημείωση: Το διάλυμα θα πρέπει να ψύχεται σε θερμοκρασία δωματίου πριν από τη ρύθμιση της τιμής pH, επειδή η τιμή pH του διαλύματος Tris ποικίλλει σημαντικά με την θερμοκρασία,

Για κάθε αύξηση της θερμοκρασίας κατά 1 °C, το pH του διαλύματος μειώνεται κατά περίπου 0,03 μονάδες.

Τα πλεονεκτήματα του Tris-HCl buffer είναι:

1Επειδή η βάση Tris είναι πιο αλκαλική, μπορείτε να χρησιμοποιήσετε αυτό το σύστημα αποθήκευσης για την παρασκευή ενός διαλύματος αποθήκευσης με ευρύ φάσμα τιμών pH από όξινη έως αλκαλική.

2 Μικρή παρεμβολή στις βιοχημικές διεργασίες, καμία βροχόπτωση με ιόντα ασβεστίου, μαγνησίου και βαρέων μετάλλων.

Τα μειονεκτήματα είναι:

1 Η τιμή pH του διαλύματος tampon επηρεάζεται σημαντικά από τη συγκέντρωση του διαλύματος, το διαλύμα tampon αραιώνεται δέκα φορές και η μεταβολή της τιμής pH είναι μεγαλύτερη από 0.1;

2Η επίδραση της θερμοκρασίας είναι μεγάλη και η αλλαγή της θερμοκρασίας έχει μεγάλη επιρροή στην τιμή pH του διαλύματος-αποθέτη, δηλαδή:031, για παράδειγμα: το pH του διαλύματος-απόσβεσης σε 4°C=8.4, τότε η τιμή pH σε 37°C= 7.4, επομένως πρέπει να παρασκευάζεται στη θερμοκρασία χρήσης, το Tris-HCl buffer που παρασκευάζεται σε θερμοκρασία δωματίου δεν μπορεί να χρησιμοποιηθεί σε θερμοκρασία 0 °C ~ 4 °C.

3 Το CO2 απορροφάται εύκολα από τον αέρα, επομένως το προετοιμασμένο απόσβεση πρέπει να είναι στενά σφραγισμένο.

4 Αυτό το διάλυμα αναισθητικού θα παρεμβαίνει σε ορισμένα ηλεκτρόδια pH, επομένως χρησιμοποιήστε ένα ηλεκτρόδιο συμβατό με το διάλυμα Tris.

Το διάλυμα Tris μπορεί να απορροφήσει διοξείδιο του άνθρακα από τον αέρα, δώστε προσοχή στην σφραγίδα κατά τη διάρκεια της αποθήκευσης, αν χρειάζεστε στείρωση, μπορείτε να προσθέσετε αζίδιο νατρίου.

Το TE είναι το Tris-EDTA buffer (10mM Tris, 1mM EDTA, pH7,4 pH7,6 pH8,0).

Συνήθως χρησιμοποιούνται αντιδραστήρες μοριακής βιολογίας για διάλυση DNA.

Προετοιμάστε 10×TE Buffer (pH7).4, 7.6, 8.0)

Συγκέντρωση συστατικού: 100mM Tris-HCl, 10mM EDTA

Όγκος παρασκευής: 1 λίτρο

Μέθοδος παρασκευής:

1. Μετρήστε το ακόλουθο διάλυμα και τοποθετήστε το σε φλιτζάνι 1 λίτρων.

1M Tris-HCl Buffer (pH7.4, 7.6, 8.0) 100 ml

500 mM EDTA (pH8.0) 20 ml

2Προσθέστε περίπου 800 ml αποιονισμένου νερού στο φλιτζάνι και ανακατέψτε ομοιόμορφα.

3Μετά τη ρύθμιση του όγκου σε 1L, αποστειρώστε σε υψηλή θερμοκρασία και υψηλή πίεση.

4- Αποθηκεύεται σε θερμοκρασία δωματίου.