Ο σημαντικός ρόλος guanidine των αλατισμένων μέσων μεταφορών δειγμάτων RNA στην ανίχνευση νουκλεϊνικού οξέος

Ο νέος στεφανιαίος προκαλούμενος φόβος πνευμονίας το 2020, όχι μόνο απαίτησε τις ζωές πολλών ανθρώπων, αλλά και αναστάτωσε το ρυθμό της ζωής. Λόγω μιας επιδημίας, το ΑΕΠ της Κίνας έχει πέσει κατακόρυφα, και η οικονομία έχει επιστρέψει άμεσα μια δεκαετία πριν. Ακόμα κι αν η επιδημία είναι σχετικά υπό έλεγχο, οι εμπειρογνώμονες δεν μπορούν να εγγυηθούν ότι έχει ελεγχθεί εντελώς, και θα κάνει ακόμη και μια επιστροφή. Η δοκιμή νουκλεϊνικού οξέος είναι αυτήν την περίοδο η κύρια μέθοδος διάγνωσης και ελέγχου της νέας στεφανιαίας πνευμονίας. Εντούτοις, η δοκιμή νουκλεϊνικού οξέος αντιμετωπίζει επίσης τα ατελείωτα προβλήματα. Παραδείγματος χάριν, τα αποτελέσματα της δοκιμής είναι ένας μεγάλος αριθμός ψεύτικων αρνητικών. Για αυτό το πρόβλημα, τα μέσα μεταφορών δειγμάτων RNA παρέχουν τη μεγάλη βοήθεια.

Μέσα μεταφορών ιών (που αδρανοποιούνται και μη-που αδρανοποιούνται)

Πρίν εξάγουν το νουκλεϊνικό οξύ δειγμάτων, τα κοινά μέσα μεταφορών δειγμάτων πρέπει να βάλουν το δείγμα σε ένα περιβάλλον επάνω από 56°C για να αδρανοποιήσουν τον ιό. Αυτή η διαδικασία αδρανοποίησης προστατεύει αναμφισβήτητα το προσωπικό στην επιθεώρηση από την έκθεση ιών, αλλά καταστρέφει επίσης την ακεραιότητα του προερχόμενου από ιό νουκλεϊνικού οξέος, αναγκάζοντας μερικά δείγματα για να μην ανιχνευθεί κανονικά, το οποίο είναι ένας από τους λόγους για το υψηλό ψεύτικο αρνητικό ποσοστό.

Η υψηλής θερμοκρασίας θέρμανση θα αυξήσει την υποβάθμιση του RNA και θα μειώσει το ποσό ανίχνευσης δειγμάτων. Η χρησιμοποίηση των μέσων μεταφορών RNA μπορεί αποτελεσματικά να εμποδίσει την υποβάθμιση του RNA. Όσον αφορά τη συντήρηση μετά από τον ιό το δείγμα συλλέγεται, παραδείγματος χάριν, αφότου επιλέγεται η pharyngeal πατσαβούρα, το δείγμα συσκευάζεται και τίθεται έπειτα στο σωλήνα δειγματοληψίας. Όχι όλοι οι αποστειρωμένοι σωλήνες δειγματοληψίας μπορούν να χρησιμοποιηθούν για να αποθηκεύσουν τους ιούς, τουλάχιστον τα μέσα μιας RNA μεταφορών δειγμάτων απαιτούνται για να σώσουν. Για την αποθήκευση ιών, τα μη-αδρανοποιημένα μέσα μεταφορών ιών χρησιμοποιούνται γενικά.

Τα συστατικά των μη-αδρανοποιημένων μέσων μεταφορών ιών είναι: Υγρό ίδρυμα δεσμίδων, gentamicin, μυκητιακά αντιβιοτικά, BSA (β), cryoprotectant, βιολογικοί απομονωτής και αμινοξέα. Ο συνδυασμός πολλαπλάσιων αντιβιοτικών έχει τα αντιβακτηριακά και αντιμυκητιακά αποτελέσματα. Η λευκωματίνη το (BSA) βοοειδών ορών ως πρωτεϊνικός σταθεροποιητής μπορεί να διαμορφώσει μια προστατευτική ταινία στο πρωτεϊνικό κοχύλι ιών, που καθιστά το δύσκολο να αποσυνθέσει και να εξασφαλίσει την ακεραιότητα του ιού. Το ουδέτερο περιβάλλον που κατασκευάζεται από τις βοήθειες απομονωτών δεσμίδων αυξάνει το χρόνο επιβίωσης του ιού και τη σταθερότητα της μόλυνσης. Το πλεονέκτημά του είναι ότι μπορεί αποτελεσματικά να συντηρήσει τη δραστηριότητα του ιού. Είναι κατάλληλο για την επόμενες απομόνωση και την καλλιέργεια του ιού, αλλά η προϋπόθεση είναι ότι πρέπει να αποθηκευτεί σε μια χαμηλή θερμοκρασία.

Το RNA υποβιβάζεται εύκολα, και RNase είναι απλά ο φυσικός εχθρός της εξαγωγής RNA. RNase έχει ένα ευρύ φάσμα των πηγών και μπορεί να περιλάβει τους διάφορους οργανισμούς στη φύση. Επομένως, είναι δύσκολο να εγγυηθεί ότι RNase δεν θα αναμιχθεί στα δείγματα που συλλέγετε. RNase υποβιβάζει επίσης το RNA στη θερμοκρασία δωματίου, έτσι πρέπει να αποθηκεύσουμε τα δείγματα σε 4° (βραχυπρόθεσμο) ή -70° (μέσος-μακρύς όρος). Εάν θέλουμε να αποθηκεύσουμε τον ιό RNA για πολύ καιρό, πρέπει να χρησιμοποιήσουμε το υγρό άζωτο. Σε πολλές περιπτώσεις, το πείραμα εξαγωγής απαιτεί τη γρήγορη λύση του δείγματος μετά από την αποκατάσταση, και ακόμη και η λειτουργία στον πάγο μπορεί να μειώσει το ποσοστό υποβάθμισης RNA. Εάν υπάρχουν λίγα προερχόμενα από ιό δείγματα RNA που συλλέγονται στο αρχικό δείγμα, θα γίνει λιγότεροι μετά από μια περίοδο RNase υποβάθμισης. Αφότου θερμαίνεται η θερμοκρασία σε 56°, η δραστηριότητα του ενζύμου αυξάνεται. Σε 92°, το ένζυμο δεν θα μετουσιωθεί, αλλά η αποδοτικότητα θα βελτιωθεί περαιτέρω. Κατόπιν το φαινόμενο υποβάθμισης θα είναι σοβαρότερο.

Υπάρχει οποιοσδήποτε τρόπος να σωθεί ο ιός χωρίς να αναλύσει από RNase; Η απάντηση είναι τα guanidine αλατισμένα μέσα μεταφορών ιών RNA, το οποίο είναι τα μέσα μεταφορών αδρανοποίησης ιών.

Guanidine τα άλατα περιλαμβάνουν γενικά guanidine το υδροχλωρίδιο, guanidine το νιτρικό άλας, το cyanoguanidine και τους ομοίους, οι οποίοι μπορούν αποτελεσματικά να μετουσιώσουν τις πρωτεΐνες. RNase είναι επίσης μια πρωτεάση που θα μετουσιωθεί και θα χάσει τον αρχικό ρόλο της. Το κοχύλι ιών αποτελείται επίσης από την πρωτεΐνη, έτσι το guanidine άλας μπορεί επίσης να αδρανοποιήσει τον ιό. Η διαδικασία θέρμανσης 56° μπορεί να παραλειφθεί.

Τα μέσα μεταφορών αδρανοποίησης ιών μπορούν να αδρανοποιήσουν τους ιούς και να μειώσουν τη μολυσματικότητα των δειγμάτων ιών, αποβάλλοντας τη διαδικασία της υψηλής θερμοκρασίας θέρμανσης βελτιώνουν πολύ την ακρίβεια της ανίχνευσης νουκλεϊνικού οξέος. Από την επιδημία, Desheng έχει δουλεψει σκληρά για να αναπτύξει τα μέσα μεταφορών ιών για να διευκολύνει την ανίχνευση νουκλεϊνικού οξέος. Τα μέσα μεταφορών ιών Desheng αδρανοποιούνται και μη-αδρανοποιούνται, και οι ρινικές και pharyngeal πατσαβούρες είναι επίσης διαθέσιμες.